叶绿体色素的提取和分离（纸层析法）

下面我们介绍一下叶绿体色素的提取和分离方法，并了解一下叶绿体色素的种类。叶绿体中一般含有绿色素（叶绿素a和 b）和黄色素（胡萝卜素和叶黄素）。这两类色素均不溶于水，而溶于有机溶剂中。
      因此，常用酒精或丙酮来提取。色素分离方法很多，纸层析是最简便的一种。当溶剂不断地从滤纸上流过时，由于混合物中各成分在固定相和流动相间具有不同的分配系数，因此，它们的移动速度不同，便可将混合取液中的各种色素分离开。实验所需要的材料和用具：菠菜叶片（或其它新鲜绿叶）、台天平、研钵、量筒、漏斗、试管、试管架、色层分析滤纸、细玻棒、大培养皿两个（底和盖直径相等）、95％酒精、碳酸钙、气油（纯净无色的）、小酒杯（或平底短玻管）1个、剪刀、滴管。
      实验步骤如下：
      1.选取鲜绿的菠菜叶片，擦净、剪碎后称取3克鲜叶，放入研钵中，加少许碳酸钙（可中和细胞中的有机酸，避免形成去镁叶绿素）和 5毫升酒精，研磨成浆糊状。再加酒精5毫升，研匀后用漏斗过滤，滤液即为叶绿体色素提取液，内含有叶绿素a、b及叶黄素和胡萝卜素。
      2.取色层分析滤纸，剪成圆形，其直径应略大于培养皿的直径（如无层析滤纸，也可用圆形定性或定量滤纸）。在滤纸圆心戳一圆形小孔。另取同样的滤纸，剪成长5厘米、宽 1.5厘米的窄条，用细玻棒沿长度方向卷成1.5厘米长的纸捻，抽出玻棒后再进一步搓成均匀、紧密的纸捻。
      3.用细口滴管吸取叶绿体色素提取液，滴在纸捻的一端，风干（或用电吹风吹干），再滴，再风干，如此重复3－5次。
      4.将滴有色素的纸捻端插入圆形滤纸中心小孔中，使纸捻与圆形滤纸紧密接触，且与纸面平齐，切勿高出纸面。
      5.取两个直径相等的干燥培养皿，在一个培养皿内放一小酒杯）或平底短玻管），杯内加入适量的汽油（或石油醚）做为扩散剂。把插有纸捻的圆形滤纸平放在培养皿上，使纸捻下端浸入汽油中，迅速盖上另一培养皿，两培养皿周边对齐。
      6.小杯内的汽油沿纸捻扩散到圆形滤纸上，并推动叶绿体色素也向滤纸四周扩散。待汽油扩散到培养皿边缘时。取出滤纸，即可看到四种色素分离成四个同心圆环。用铅笔标出各种色素的位置和名称。由于各种色素在扩散剂中的溶解度不同，以及滤纸对各色素的吸附能力不同，而达到分离的目的。扩散最快的是胡萝卜素，为橙黄色；其次是叶黄素，为鲜黄色；再次是叶绿素a，为蓝绿色；扩散最慢的是叶绿素b，为黄绿色。